REGJISTRI I OBJEKTEVE TE PRONESISE INDUSTRIALE

Lloji i Aplikimit
EPO patents
Nënlloji i Aplikimit
EPO Patent
(10) Numri dhe Data e Regjistrimit
6523 2017.05.30
Status
Refuzuar
(180) Data e mbarimit të afatit
2028.12.04
(20) Numri dhe Data e Depozitimit
AL/P/2017/271 2017.05.12
(40) Numri dhe Data e Publikimit
2017.06.27
(86) Data dhe Numri Ndërkombëtar i Depozitimit
13181046.7 2008.12.04
Status
Refuzuar
Data dhe Numri Ndërkombëtar i Publikimit
EP2666854 2017.03.15
(30) Detajet e Prioritetit
Kodi ID e prioritetit
US 20070992319
US 20080327809
(51) Klasat e KNP-së (IPC)
(71/73) Aplikanti
Aplikanti Adresa
Proteon Therapeutics, Inc. 200 West Street, Waltham, MA 02451
(72) Shpikës
Emri Adresa
Franano, F. Nicholas 1010 West 69th Terrace, Kansas City, MO 64113 , US
Bland, Kimberly 6032 McGee Street, Kansas City, MO 64113 , US
Wong, Marco D. 15501 Howe Street, Overland Park, Kansas, MO 66224 , US
Ding, Bee C. 15501 Howe Street, Overland Park, Kansas, MO 66224 , US
(74) Emri i Përfaqësuesit
Emri Adresa
Aleksandra ARSENI Rr.Reshit Çollaku, Pall. Shallvare, Shk.5,Ap70/4 Tirane. , AL
Aleksandra ARSENI Rr.Reshit Çollaku, Pall. Shallvare, Shk.5,Ap70/4 Tirane. , AL
(54) Titull
PROTEINAT ELASTAZE TE RIKOMBINANTE DHE METODAT E PRODHIMIT DHE PERDORIMIT TE TYRE
(57) Abstrakt
(58) Pretendime
Pretendim Përshkrim
1 Proteinë autoaktivizuese proelastazë që përmban (i) sekuencë propeptid që përmban një sekuencë peptid aktivizues të elastazës që përmban amino acide që zgjedhin P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1, nga të cilët amino acidet P3-P2-P1 janë krijuar për të formuar një sekuencë që njeh elastazën, e lidhur në mënyrë operuese me (ii) një sekuencë amino acid të elastazës së maturuar të llojit I, tre amino acidet N-terminal të së cilës janë zgjedhur P1’- P2’- P3’, ku (a) sekuenca propeptid nuk është me lindje në elastazën e maturuar të llojit I, dhe (b) kur sipas kushteve të autoaktivizimit, prodhohet një lloj i maturuar i elastazës.
2 Proteina proelastazë autoaktivizuese e pretendimit 1, në të cilën: (a) sekuenca e njohjes së elastazës ka një mbetje proline të vendosur në pozicionin P2; (b) amino acidet P3 deri P1 përbëhen nga sekuenca të amino acidit të SEK ID NO:11, SEK ID NO:12, SEK ID NO:13, SEK ID NO:18, SEK ID NO:20, SEK ID NO:21, ose SEK ID NO:93; (c) amino acidet P5 deri P3’ përbëhen nga amino acidet e SEK ID NO:48, SEK ID NO:49, SEK ID NO:52, SEK ID NO:53, SEK ID NO:54, SEK ID NO:55, SEK ID NO:56, SEK ID NO:57, SEK ID NO: 58, SEK ID NO: 59, ose SEK ID NO:60; ose (d) amino acidet P10 deri P1 përbëhen nga sekuenca amino acid të SEK ID NO:72, SEK ID NO:73, ose SEK ID NO:80.
3 Proteina proelastazë autoaktivizuese e pretendimit 1 ose pretendimit 2, ku: (a) proteina proelastazë autoaktivizuese përmban sekuencë amino acid SEK ID NO:66 ose SEK ID NO:68; (b) elastaza e maturuar e llojit I është një elastazë e pjekur humane e llojit I, që përmban në mënyrë opsionale një sekuencë amino acid që ka: (i) të paktën 85% sekuencë identiteti, të paktën 95% sekuencë identiteti, të paktën 98% sekuencë identiteti, të paktën 99% sekuencë identiteti ose 100% sekuencë identiteti në sekuencën amino acid të SEK ID NO:1, SEK ID NO:78, ose SEK ID NO:84; ose (ii) jo më shumë se 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime amino acid konservative krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:1 ose SEK ID NO:84 dhe/ose jo më shumë se 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësues jo-konservative amino acid krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:1, SEK ID NO:78 ose SEK ID NO:84; ose (c) elastaza e maturuar e llojit I është një elastazë e maturuar porcine e llojit I, që përmban në mënyrë opsionale një sekuencë amino acid që ka: (i) të paktën 85% identitet sekuence, të paktën 95% identitet sekuence, të paktën 98% identitet sekuencë, të paktën 99% identitet sekuence ose 100% identitet sekuence në sekuencën amino acid të SEK ID NO:39; ose (ii) jo më shumë se 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime konservative amino acid krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:39 dhe/ose jo më shumë se 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësues jo-konservativ amino acid krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:39.
4 Proteina autoaktivizuese proelastazë e cdonjërit prej pretendimeve 1 deri 3, që: (a) që nuk ka një sekuencë sinjali; (b) përmban një sekuencë sinjali, që është në mënyrë opsionale: (i) sekuencë sinjali që është e operueshme në Pichia pastoris, që është në mënyrë opsionale një sekuencë maja me sinjal α-faktor dhe/ose përmban sekuencë amino acid të SEK ID NO:34; ose (ii) sekuencë të sinjalit të sekrecionit gjitar, që është në mënyrë opsionale një sekuencë sinjali elastaze humane lloji 1 ose një sekuencë sinjali elastaze porcine lloji 1; (c) përmban propeptid maja faktor alfa; (d) përmban një ose më shumë sekuenca frenimi, në mënyrë opsionale ku të paktën një sekuencë frenimi është sekuencë Kex2 dhe/ose një sekuencë STE13; (e) nuk ka një mbetje N-terminal metionin; ose (f) përmban një mbetje N-terminal metionin.
5 Kulturë qelize supernatante që përmban proteinën proelastazë pankreatike autoaktivizuese të llojit I të cdonjërit prej pretendimeve 1 deri 4.
6 Molekulë e acidit nukleik që kodon proteinën proelastazë autoaktivizuese të cdonjërit prej pretendimeve 1 deri 4.
7 Vektor që përmban molekulën e acidit nukleik të pretendimit 6, në mënyrë opsionale ku; (a) sekuenca që kodon proteinën autoaktivizuese proelastazë është shumëfishuar; (b) sekuenca që kodon proteinën autoaktivizuese proelastazë përdor kodone që janë përdorur preferueshëm në Pichia pastoris; ose (c) vektori përmban një gjen shenjues të përzgjedhshëm për rezistencën Zeocin.
8 Qelizë pritëse që: (a) është projektuar gjenetikisht për të shprehur molekulën e acidit nukleik të pretendimit 6, në mënyrë opsionale ku: (i) një kopje e acidit nukleik në fjalë është integruar në gjenomin e qelizës pritëse; ose (ii) më shumë se një kopje e acidit nukleik në fjalë është integruar në gjenomin e qelizës pritëse, në mënyrë opsionale ku 2-5 kopje, 2 kopje ose 3 kopje të acidit nukleik janë integruar në gjenomin e qelizës pritëse; ose (b) përmban vektorin e pretendimit 7, në mënyrë opsionale ku: (i) një kopje e vektorit në fjalë është integruar në gjenomin e qelizës pritëse; ose (ii) më shumë se një kopje e vektorit në fjalë është integruar në gjenomin e qelizës pritëse, në mënyrë opsionale ku 2-5 kopje, 2 kopje ose 3 kopje të vektorit janë integruar në gjenomin e qelizës pritëse.
9 Qeliza pritëse e pretendimit 8, ku shprehja e proteinës autoaktivizuese proelastazë është nën kontrollin e një promotori të një metanoli të përshtatshëm dhe/ose ku qeliza pritëse është qelizë pritëse Pichia pastoris.
10 Metoda e prodhimit të një proteine autoaktivizuese proelastazë, që përmban kultivimin e qelizës pritëse të pretendimit 8 ose pretendimit 9 sipas kushteve që rezultojnë në prodhimin e proteinës autoaktivizuese proelastazë dhe rikuperimin e proteinës autoaktivizuese proelastazë, në mënyrë opsionale ku: (a) qeliza pritëse është kultivuar në media komplekse, që është metanol kompleks media i neutralizuar në mënyrë opsionale ose glicerol i neutralizuar kompleks media; dhe/ose (b) shprehje e proteinës autoaktivizuese proelastazë është nën kontrollin e promotorit metanol-formues dhe ku kushtet e kultivimit përfshijnë një periudhë për futjen e metanolit; dhe/ose (c) qeliza pritëse është kultivuar në prani të një citrati, suksinati ose përbërësi acetat, në mënyrë opsionale ku: (i) përbërësi citrat, suksinat ose acetat është citrat sode, suksinat sode ose acetat sode, përkatësisht; dhe/ose (ii) të paktën një përbërës citrat, suksinat ose acetat është i pranishëm në kulturën në fjalë me përqëndrim prej 5 - 50 mM, 7.5 - 100 mM, 10 - 150 mM, 50 - 200 mM, 100 - 150 mM, 75 - 125 mM, or 90 - 110 mM; dhe/ose (d) qeliza pritëse është qeliza pritëse Pichia pastoris, dhe ku kushtet e kultivimit përmbajnë një periudhë të rritjes ose stimulimit: (i) në temperaturë prej 22 - 28C°; ose (ii) në pH prej 2-6; dhe/ose (e) qeliza pritëse është kultivuar në mjet kompleks dhe hapi i rikuperimit të proteinës autoaktivizuese proelastazë përmban supernatant rikuperues nga kultura e qelizës pritëse dhe në mënyrë opsionale përmban më tej proteine rikuperuese autoaktivizuese proelastazë nga supernatant.
11 Metoda e pretendimit 10, që përmban më tej sjelljen e proteinës së rikuperuar autoaktivizuese proelastazë në kushte aktivizimi të tilla që proteina e maturuar e llojit I elastazë është prodhuar, në mënyrë opsionale ku: (a) kushtet e aktivizimit përmbajnë rregullimin e pH të një tretësire që përmban proteinën autoaktivizuese proelastazë në një pH baze, një pH prej 7-9; ose një pH prej 8 deri sa të prodhohet një proteinë elastazë e maturuar e llojit I, dhe në mënyrë opsionale: (i) mbajtjen e pH për një periodhë prej 0.5-8 orësh, 2-7 orësh, ose 6 orësh; (ii) ekspozimi në një pH baze është kryer në një temperaturë prej 22°C - 28°C ose një temperaturë prej 26°C; dhe/ose (iii) përqëndrimi i proteinës së rikuperuar autoaktivizuese proelastazë në tretësirë është më pak se 10 mg/ml, më pak se 5 mg/ml, më pak se 2 mg/ml, më pak se 1 mg/ml, më pak se 0.5 mg/ml, më pak se 0.25 mg/ml dhe/ose të paktën 0.1mg/ml ose të paktën 0.2 mg/ml; dhe/ose (b) kushtet e aktivizimit përmbajnë shtimin e një sasie katalitike të elastazës në tretësirën që përmban proteinën autoaktivizuese proelastazë; dhe/ose (c) autoaktivizimi kryhet në prani të bazës Tris në një përqëndrim prej 50-200 mM, 75-175 mM, 100-150 mM, 75-125 mM; dhe/ose (d) mbajtjen e kushteve të aktivizimit deri sa variantet N-terminal të pakësohen në një shkallë prej 0-2%.
12 Metoda e pretendimit 11, ku: (a) hapi i autoaktivizimit kryhet pas pastrimit të proteinës proelastazë autoaktivizuese; ose (b) hapi i autoaktivizimit kryhet në supernatant.
13 Metoda e pretendimit 11 ose pretendimit 12, që përmban më tej hapin e izolimit të proteinës elastazë të maturuar të llojit I, në mënyrë opsionale ku: (a) proteina elastazë e maturuar e llojit I është izoluar nga kromatografia e kollonës, në mënyrë opsionale ku kromatografia përfshin shkëmbim të kationit të kromatografisë; dhe/ose (b) janë hequr forma të glikosilatuara të proteinës elastazë të maturuar të llojit I.
14 Metodë për prodhimin e një formulimi të proteinës elastazë të maturuar të llojit I, metoda në fjalë përmban: (a) sjelljen e proteinës proelastazë të autoaktivizuar të cdonjërit prej pretendimeve 1 deri 4 në kushte autoaktivizimi të tilla që të prodhohet proteinë elastazë e maturuar e llojit I; (b) në mënyrë opsionale, pastrimi i elastazës së maturuar të llojit I; dhe (c) formulimi i proteinës elastazë të maturuar të llojit I, prej të cilave prodhimin e një përbërjeje farmaceutike që përmban proteinën elastazë të maturuar në fjalë të llojit I.
15 Metoda e pretendimit 14, që përmban pastrimin e elastazës së maturuar të llojit I nëpërmjet kromatografisë së kolonës, në mënyrë opsionale shkëmbimin e kationit të kromatografisë.
16 Metoda e pretendimit 14 ose pretendimit 15, ku formulimi i proteinës elastazës së maturuar të llojit I përmban liofilizimin e elastazës në fjalë të maturuar të llojit I, në mënyrë opsionale përmban më tej përzierjen e proteinës elastazë të maturuar të llojit I me një ose më shumë përbërës neutralizues para ose pas liofilizimit.
17 Përbërje farmaceutike që: (a) përmban një proteinë elastazë të maturuar të llojit I që ka një aktivitet prej 20 deri 50 U/mg prej proteinës sic matet duke përdorur një analizë hidrolizë N-suksinil-Ala-Ala-Ala-pNitroanilide kolorimetrik (SLAP), ku kufiri i sipërm i trypsin në përbërjen farmaceutike në fjalë është më pak se 25 ng e trypsin për 1 mg të proteinës elastazë të maturuar të llojit I, dhe ku: (i) elastaza e maturuar e llojit I përmban një sekuencë amino acid me të paktën 85% identitet sekuence, të paktën 95% identitet sekuence, të paktën 98% identitet sekuence ose të paktën 99% identitet sekuence, ose përmban 100% identitet sekuence, në sekuencën amino acid të SEK ID NO:1, SEK ID NO:78, ose SEK ID NO:84; ose (ii) proteina elastazë e maturuar e llojit I përmban një sekuencë amino acid që ka jo më shumë se 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime konservative amino acid dhe/ose jo më shumë se 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime jokonservative amino acid krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:1, SEK ID NO:78, ose SEK ID NO:84; ose (b) përmban një proteinë elastazë të maturuar të llojit I që ka një aktivitet prej 20 deri 100 U/mg të proteinës të matur duke përdorur një analizë hidrolize N-suksinil-Ala-Ala-Ala-pNitroanilide (SLAP) kolorimetrik, ku kufiri i sipërm i trypsin në përbërjen farmaceutike në fjalë është më i vogël se 25 ng e trypsin për 1 mg të proteinës elastazë të maturuar të llojit I, dhe në mënyrë opsionale ku: (i) elastaza e maturuar e llojit I përmban një sekuencë amino acid me të paktën 85% identitet sekuence, të paktën 95% identitet sekuence, të paktën 98% identitet sekuence ose të paktën 99% identitet sekuence, ose përmban 100% identitet sekuence, në sekuencën amino acid të SEK ID NO:39; ose (ii) proteina elastazë e maturuar e llojit I përmban një sekuencë amino acid që ka jo më shumë se 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime konservative amino acid dhe/ose jo më shumë se 5, 4, 3, 2 ose 1 zëvendësime jokonservative amino acid krahasuar me sekuencën amino acid të SEK ID NO:39.
18 Përbërja farmaceutike e pretendimit 17, ku: (a) kufiri i sipërm i aktivitetit trypsin në përbërjen në fjalë është më pak se 4, 3, 2, ose 1.56 ng për 1 mg të proteinës elastazë të maturuar të llojit I, në mënyrë opsionale ku kufiri i sipërm i aktivitetit trypsin në përbërjen në fjalë është matur duke përdorur një analizë të aktivitetit trypsin N-benzoyl-Phe-Val-Arg pNitroanilide (BENZ) kolorimetrik; (b) përbërja farmaceutike është e cliruar nga trypsin; dhe/ose (c) përbërja farmaceutike karakterizohet nga një ose më shumë prej të mëposhtmeve: (i) përbërja farmaceutike është e cliruar nga proteinat bakteriale; (ii) përbërja farmaceutike është e cliruar nga proteinat gjitare përvec proteinës elastazë së maturuar në fjalë; (iii) sasia e endotoksinës në përbërjen farmaceutike në fjalë nuk e tejkalon sasinë e pranueshme farmaceutike, nuk e kalon 10 EU për gram të elastazës lloji I ose nuk e tejkalon 5 EU për gram të elastazës lloji I; (iv) përbërja farmaceutike është në formën e një njësie dozazhi që përmban 0.0033 mg - 200 mg të proteinës elastazë të maturuar në fjalë; (v) përbërja farmaceutike përmban polisorbat-80; (vi) përbërja farmaceutike përmban dekstran; (vii) përbërje farmaceutike përmban jone sode, jone kaliumi, jone fosfati, jone kloridi, dhe polisorbat 80; (viii) përbërje farmaceutike përmban jone sode, jone kaliumi, jone fosfati, jone kloridi, dhe dekstran; (ix) përbërje farmaceutike përmban jone sode, jone kaliumi, jone fosfati, jone kloridi, polisorbat-80 dhe dekstran; (x) përbërje farmaceutike përmban trehalozë; (xi) përbërje farmaceutike përmban mannitol; (xii) proteinë elastazë e maturuar në përbërje farmaceutike mban 60% deri 100% të aktivitetit të tij specific pas të paktën një muaji në ruajtje në 4°C, pas të paktën tre muajsh në ruajtje në 4°C ose pas të paktën gjashtë muajsh ruajtje në 4°C.
19 Përbërje farmaceutike e pretendimit 17(a), që: (a) përmban më pak se 0.5% nga pasha e proteinës që përbëhet nga SEK ID NO:2 dhe/ose më pak se 0.5% nga pesha e proteinës që përbëhet nga SEK ID NO:3, dhe është e cliruar në mënyrë opsionale ose thelbësisht e cliruar nga një proteinë e SEK ID NO:2 dhe nga një proteinë që përbëhet nga SEK ID NO:3; dhe/ose (b) është e cliruar ose thelbësisht e cliruara nga cdo proteine që përbëhet nga SEK ID NOs:70 dhe 71; dhe në mënyrë opsionale (c) është e cliruar ose thelbësisht e cliruar nga një ose më shumë proteina që përbëhen nga secili prej SEK ID NO: 37, 38, 85, 86, 94, 95, 104, 105, 106, 107, dhe 108, preferueshëm të cliruara ose thelbësisht të cliruara nga cdo proteine që përbëhet nga secila prej SEK ID NO: 37, 38, 85, 86, 94, 95, 104, 105, 106, 107, ose 108.
20 Përbërje farmaceutike e cdonjërit prej pretendimeve 17 deri 19, që është një përbërje farmaceutike e liofilizuar.
21 Përbërja farmaceutike e cdonjërit prej pretendimeve 17 deri 19, që është përbërje e lëngshme farmaceutike, dhe në mënyrë opsionale: (a) përmban klorid sode; (b) përmban salin e zbutur me fosfat; (c) përmban zbutës fosfat; (d) përmban manitol në përqëndrim prej 2 - 10% peshë për volum ose 2.5-4% peshë për volum; (e) përmban polisorbat-80 në një përqëndrim prej 0.001 - 5% peshë për volum ose 0.01% peshë për volum; (f) ka një osmolalitet prej 125 - 500 mOsm/kg ose 275-325 mOsm/kg; ose (g) ka një përqëndrim të elastazës së maturuar të llojit I prej 0.1 mg/ml - 50 mg/ml.
22 Përbërja farmaceutike e pretendimit 21, që: (a) përmban 137 mM klorid sode, 2.7 mM fosfat kaliumi, 10 mM fosfat sode, ka një pH prej 7.4, në mënyrë opsionale ku: (i) përbërja farmaceutike përmban 0.01% polisorbat-80 dhe në mënyrë opsionale kur përqëndrimi proteinës elastazë së maturuar të llojit I në përbërjen farmaceutike në fjalë është 0.001-50 mg/ml; (ii) përqëndrimi i proteinës elastazë të maturuar të llojit I në përbërjen farmaceutike në fjalë është 0.001-50 mg/ml dhe përbërja farmaceutike përmban 5-10% ose 6-9% të një eksipienti të zgjedhur nga dekstrozë, laktozë, manitol, sukrozë, trehalozë, dekstran-70, glicerin, arginin, glicin, dekstran-44 ose dekstran-18; ose (iii) përqëndrimi i proteinës elastazë të matururuar të llojit I në përbërjen farmaceutike në fjalë është 0.001-50 mg/ml dhe përbërja përmban më tej 8% dekstran-18 dhe në mënyrë opsionale 0.1% polisorbat-80; ose (b) përmban një ose më shumë dekstrozë, laktozë, manitol, sukrozë, trehalozë, dekstran-70, glicerin, arginin, glicin, dekstran-44, dhe dekstran-18 një përqëndrim agregat prej 2-10% w/v, 2.5-8% w/v, ose 4-6% w/v.
23 Përbërje farmaceutike sic përcaktohet në cdonjërin prej pretendimeve 17 deri 22 për përdorim në një metodë të: (a) trajtimin ose parandalimin e një sëmundjeje të rrjedhës biologjike nëpërmjet administrimit të përbërjes farmaceutike tek një pacient në nevojë të saj, në mënyrë opsionale ku: (i) përbërja farmaceutike administrohet jo me ushqimin; (ii) përbërja farmaceutike administrohet direkt në një mur enë gjaku; (iii) përbërja farmaceutike administrohet direkt në sipërfaqen e jashtme adventiciale të një ene të ekspozuar nëpërmjet kirurgjisë; ose (iv) përbërja farmaceutike administrohet në një enë duke përdorur një kateter për marrjen e ilacit; (b) rritjes në mënyrë terapeutike të diametrit të arterie ose vene në një subjekt human në nevojë të saj, duke administruar në mënyrë lokale përbërjen farmaceutike në murin e arteries ose venës në subjektin human; (c) parandalimin e vazospazmës së një arterieje ose vene në një subjekt human në nevojë të saj nëpërmjet administrimit në mënyrë lokalle të përbërjes farmaceutike në murin e arteries ose venës në subjektin human; (d) trajtimin e një arterieje ose vene të errësuar në një subjekt human në nevojë të një trajtimi të tillë nëpërmjet administrimit në mënyrë lokale të përbërjes farmaceutike në murin e arteries ose venës në subjektin human, ku administrimi në fjalë rezulton në proteolizën e elastinit në murin e arteries ose venës që con në zmadhimin e diametrit të arteries ose venës; (e) trajtimin e një arterieje ose vene të lidhur me një transferim të hemodializës arteriovenoze ose një fistul arteriovenoz në një subjekt human në nevojë të një trajtimi të tillë nëpërmjet administrimit në mënyrë lokale të përbërjes farmaceutike në murin e arteries ose venës në subjektin human, ku administrimi në fjalë rezulton në proteolizën e elastinit në mur të arteries ose venës që con në zmadhimin e diametrit të arteries ose venës; ose (f) trajtimine një vene në një subjekt human për përdorim në hemodializë nëpërmjet administrimit në mënyrë lokale të përbërjes farmaceutike në murin e venës në subjektin human, ku administrimi rezulton proteolizën e elastinit në murin e venës që con në zmadhimin e diametrit të venës.
© 2026 DPPI